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信号蛋白质14-3-3ζ的高效融合表达和鉴定
作者:祖莹        沈继龙        汪学龙        李德发 
单位:祖莹(蚌埠医学院免疫教研室 安徽 蚌埠 233003)沈继龙 汪学龙(安徽医科大学病原生物学教研室 安徽 合肥 230032)李德发(蚌埠医学院免疫研究所 安徽 蚌埠 233003) 
关键词:14-3-3ζ      克隆      信号传导      克雅症 
分类号:R318.04
出版年,卷(期):页码:2002,9(4):0-0
摘要:
目的利用分子克隆技术在原核细胞中研究14-3-3ζ蛋白的表达. 方法 14-3-3ζ cDNA 经测序后,亚克隆至pBK-CMV表达载体,转化大肠杆菌BL21菌株,筛选阳性克隆,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达. 结果经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白印迹(Western blot)分析,表达的融合蛋白相对分子质量为32 000左右,能与14-3-3ζ蛋白特异性多克隆抗体发生免疫结合反应. 结论人14-3-3ζ蛋白在原核细胞中有大量表达,且具有良好的免疫反应性.
基金项目:
安徽省自然科学基金
作者简介:
参考文献:
Deborah Morrison 14-3-3ζ:Modulators of signaling protein 1994 Andrews RK.Harris SJ.McNally T Binding of purified 14-3-3ζ signaling protein to discrete amino acid sequences within the cytoplasmic domain of the platelet membrane glycoprotein Ib-Ⅸ-Ⅴ complex 1998(02) Sambrook J.Fritsch EF.Maniatis T Molecular cloning a laboratory manual . 2nd edition 1989 Miura I Molecular cloning of cDNA for the zeta form of the 14-3-3 protein:homomlogous sequences in the 3-untranslated region of frog and human zeta is forms 1997(05) DongLiu.Jadwiga Bienkowska.Carlo Petosa Crystal structure of the zeta is form of the 14-3-3 protein 1995(13) Masters SC.Pederson KJ.Zhang L Interaction of 14-3-3 with a nonphosphorylated protein ligand,exoenzyme S of pseudomonas aeruginosa 1999(16) Xing H.Zhang S.Weinheimer C 14-3-3 proteins block apoptosis and differentially regulate MAPK cascades 2000(03) Sliva D.Gu M.Zhu YX 14-3-3 zeta interacts with the alpha-chain of human interleukin 9 receptor 2000(03) Hashiguchi M.Sobue K.Paudel HK 14-3-3ζ is an affector of tau protein phosphorylation 2000(03)
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